非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)【獸藥名稱(chēng)】通用名：非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測試劑盒商品名：無(wú)英文名稱(chēng)：African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit漢語(yǔ)拼音：Feizhouzhuwen Bingdu Shishiyingguang PCR Jianceshijihe【主要成分與含量】產(chǎn)品組份規格（48 頭份/盒） 樣品裂解液3 管（4 mL/管）熒光 PCR 反應液1 管（1.2 mL/管）陽(yáng)性對照1 管（500 μL/管）陰性對照1 管（500 μL/管）說(shuō)明書(shū)1 份【作用與用途】 用于豬全血、血清、淋巴結、脾臟、肌肉等樣本中的非洲豬瘟病毒的檢測?！居梅ㄅc判定】1用法1.1樣品采集1.1.1全血：直接取動(dòng)物新鮮血液 200 µL 備用。1.1.2組織樣品：取脾臟、淋巴結、肌肉等組織約 1 g，剪碎后取 0.1 g 進(jìn)行充分研磨，隨后加入 1.5 mL 生理鹽水進(jìn)行勻漿，將此樣本轉移至 1.5 mL 離心管中，8000 g 離心 2 min， 取上清液備用。1.2樣品處理1.2.1取需要數量的離心管（需設置陽(yáng)性對照及陰性對照），均加入樣品裂解液 190 µL；1.2.2分別加入采集的待檢樣品（全血、組織樣品等）、陽(yáng)性對照、陰性對照各 10 µL，充分混勻；1.2.3瞬時(shí)離心，取上清液備用。1.3PCR 操作步驟1.3.1取出試劑盒，從中取出實(shí)驗所需試劑，融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著(zhù)的液體；1.3.2在各 PCR 管中分別加入 20 μL 熒光 PCR 反應液，轉移至樣本準備區；1.3.3分別加入 1.2.3 步驟獲得的上清液 5 μL，混勻，瞬時(shí)離心，轉移至檢測區；1.3.4將各 PCR 管放置在儀器樣品槽相應位置，并記錄放置順序；1.3.5按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數，進(jìn)行 PCR 擴增。 體系25 μL 反應體系信號通道FAM 通道采集熒光信號。PCR反應條件階段條件循環(huán)數預變性95℃ ：3 min1PCR95℃ ：10 s4060℃ ：20 s2結果判定2.1實(shí)驗成立條件2.1.1陽(yáng)性對照：Ct 值≤30，有明顯指數增長(cháng)，呈典型的 S 型曲線(xiàn)。2.1.2陰性對照：Ct 值＞38 或無(wú) Ct 值，無(wú)明顯指數增長(cháng)期和平臺期。2.2判定標準2.2.1陽(yáng)性：樣本檢測結果 Ct 值≤33，有明顯指數增長(cháng)，表明樣本中檢測出該病毒。2.2.2可疑：樣本檢測結果 Ct 值在 33~38 范圍，應對樣本進(jìn)行復檢。如重復實(shí)驗結果 Ct 值仍在 33~38 范圍，有明顯指數增長(cháng)，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。2.2.3陰性：樣本檢測結果 Ct 值＞38 或無(wú) Ct 值，表明樣本中未檢測出該病毒?！咀⒁馐马棥浚?）實(shí)驗前請仔細閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū)，嚴格按操作步驟執行。（2）所有試劑應在規定的溫度儲存，詳細信息見(jiàn)試劑標簽。（3）為了避免交叉污染，請盡可能在無(wú)核酸酶的環(huán)境下操作，并將試驗過(guò)程分區進(jìn)行（樣本準備區、擴增檢測區等）。（4）配制 PCR 反應體系時(shí)應盡量避免氣泡產(chǎn)生，擴增前應檢查反應管是否蓋緊，以免反應液泄漏污染儀器。（5）本試劑盒可搭配標準核酸提取方法進(jìn)行樣品檢測，Ct 值等判定參數不變。（6）為保證實(shí)驗結果準確，樣品應為新鮮采集，2-8℃運輸，長(cháng)途運輸請使用干冰。（7）所有試劑應避免反復凍融?！举A藏與有效期】 ﹣20℃冷凍避光貯存，有效期為 12 個(gè)月?！疽幐瘛?48 頭份/盒