作為色譜工作者，開(kāi)發(fā)方法是不可避免的。即使有國標或行標，也需要在實(shí)驗室里從頭到尾演練一遍，不可能原封不動(dòng)地套用原有的公式。隨著(zhù)儀器的高、精、尖趨勢發(fā)展，國標或行標會(huì )正逐漸顯得太過(guò)于繁瑣和落后。但你也可以?huà)侀_(kāi)國標，針對自己實(shí)驗室的現有儀器裝備，開(kāi)發(fā)出一套別出心裁、簡(jiǎn)便快捷的方法。 開(kāi)發(fā)方法，不可避免地要對方法進(jìn)行評價(jià)。如何評價(jià)呢？主要有兩方面：一是實(shí)用性，看看你這方法是否實(shí)用，是否能夠推廣，如果你只想在自己的實(shí)驗室用一用，也可不必考慮這一方面；二是可靠性，評價(jià)可靠性的主要指標有檢測限、線(xiàn)性范圍、回收率、重復性與重現性等等?？煽啃允潜仨氃u價(jià)的。 重復性與重現性的區別與？ 重復性（repeatability）與重現性（再現性，reproducibility），二者都是用來(lái)評價(jià)分析結果的精密度。大多數人都不作嚴格區分，有的文獻中還常?；煊?。但是二者的實(shí)際意義是不一樣的。 重復性：是指同一分析人員在同一條件下所得分析結果的精密度，重現性：是指不同分析人員或不同實(shí)驗室在各自的條件下所得分析結果的精密度。也就是說(shuō)，重現性比重復性提出了更高的要求。重復性好，重現性未必好。而重現性好，重復性肯定好。二者都是用多次分析結果的RSD來(lái)表示。 對現代儀器分析而言，重復性是容易實(shí)現的，而重現性是更重要的，也是方法驗證必須考察的。 方法的重現性包括連續多次進(jìn)樣分析的重復性、不同天數間的重復性、不同型號儀器間的重現性和不同實(shí)驗室間的重現性。 何時(shí)必須進(jìn)行重現性實(shí)驗？ 當分析方法將被法定標準采用時(shí)，應進(jìn)行重現性試驗。例如，建立獸藥典分析方法時(shí)應通過(guò)不同實(shí)驗室的復核檢驗得出重現性結果，復核檢驗的目的、過(guò)程、重現性結果均應記載在起草說(shuō)明中。應注意重現性試驗用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現性結果。 重復性實(shí)驗和重現性實(shí)驗的先后順序？方法開(kāi)發(fā)人員，首先應測定重復性。即在相同條件下連續進(jìn)樣5－10次，一般要求保留時(shí)間的RSD不大于1%，峰面積的RSD不大于5%。 如果樣品要經(jīng)過(guò)預處理，還應測同一樣品多次處理的重復性。即同一樣品取3－5份作平行處理，測定結果的RSD不應大于5%。某些工業(yè)分析要求不大于10%。至于天與天之間的重復性也不應大于10%。當上述重復性滿(mǎn)足要求后，說(shuō)明該方法在你的實(shí)驗室是可靠的。 要將此方法推廣使用，還必須測定不同儀器、不同分析人員、不同實(shí)驗室之間的重現性。當這些重現性都能滿(mǎn)足要求時(shí)，這一方法的的可靠性就得到較為滿(mǎn)意的驗證。 重現性不好，怎么找原因？ HPLC分析時(shí)保留時(shí)間重現性不穩定可能的原因？HPLC分析時(shí)，保留時(shí)間重現性不穩定會(huì )影響峰面積的重現性，從而造成實(shí)驗數據不，色譜分析無(wú)法進(jìn)行，造成這方面的原因有很多，常見(jiàn)的解決方案與排查方法如下： 確認色譜柱是好的； 確認流動(dòng)相是新鮮配置的，比例沒(méi)有錯誤； 檢查一下溶劑瓶里的溶劑過(guò)濾器沒(méi)有長(cháng)菌，沒(méi)有被堵塞； 如果使用梯度洗脫方法，請確認平衡時(shí)間足夠長(cháng)； 如果是壓力不穩定，一定會(huì )影響保留時(shí)間； 仔細觀(guān)察柱前壓的變化，如果壓力穩定，就可以判斷泵的系統沒(méi)有問(wèn)題，請更換新的色譜柱試試。GC重現性不好，可能原因是？定量不重復的原因有很多，一般是兩大類(lèi)：一類(lèi)是單純性的靈敏度變化型，即除了定量重復性不合格外，其它指標未發(fā)現異常；另一類(lèi)為伴隨性靈敏度變化型，即除靈敏度變化之外還伴隨著(zhù)其它異?，F象出現，包括基線(xiàn)不穩定性、峰保留時(shí)間變化及產(chǎn)生峰形畸變等異?，F象。屬于*類(lèi)型故障的原因主要是：進(jìn)樣技術(shù)不佳、注射器有堵漏，樣品制備不均勻、進(jìn)樣口污染物堆積以及氣路存在漏氣現象等；屬于第二類(lèi)型故障的原因主要是：載氣流量變化，檢測器玷污、過(guò)載，柱溫變化以及檢測器操作條件（如氫氣、極化電壓、脈沖電壓等）發(fā)生變化。 檢測方案如下：(1)進(jìn)樣技術(shù)檢查，進(jìn)樣技術(shù)不佳是造成色譜峰不重復的zui可能原因。它通常表現為峰高、峰面積忽大忽小，峰高、峰面積大小變化無(wú)規則。提高進(jìn)樣重復性的關(guān)鍵，在于始終保持進(jìn)樣操作個(gè)大步驟的重復性，這包括取樣操作，取樣到進(jìn)樣期間的空閑時(shí)間，進(jìn)針快慢及拔出注射器的早晚，通常操作人員在經(jīng)過(guò)較多地進(jìn)樣重復性訓練之后，可以達到所需的要求。 (2)注射器的檢查，操作人員進(jìn)樣技術(shù)提高后，色譜峰靈敏度仍然無(wú)顯著(zhù)改觀(guān)，需認真檢查注射器本身是否有堵塞或泄露現象，必要時(shí)更換一個(gè)好的注射器重新進(jìn)樣實(shí)驗。一旦出現樣品峰面積重現性不好怎么辦？ 1.我們首先應該從簡(jiǎn)單的基本的入手，先不要去輕易的懷疑儀器有故障，排除一些由于自身的低級錯誤而造成該問(wèn)題的可能性（譬如樣品自身的問(wèn)題，標樣的濃度是否因配置不準確或者揮發(fā)等原因造成改變，或者因為色譜條件的改變而造成的，如分流比前后不一致等）。 2.然后下一步要做的就是檢查儀器的一些情況了，具體的包括： 進(jìn)樣口部分：更換進(jìn)樣墊，防止因為長(cháng)時(shí)間不更換墊本身被針扎松了造成漏氣；檢查玻璃襯管，更換石英棉；檢查石英棉的位置是否合適，清洗玻璃襯管，必要時(shí)更換玻璃襯管上的石墨密封圈(也可能是橡膠的)。取出襯管后用吸耳球吹掃進(jìn)樣口內部，必要時(shí)用棉棒蘸丙酮擦拭。用皂膜流量計測量清洗氣出口(PURGE)及分流出口(SPL)的流量是否合適。緊固各連接部件，如進(jìn)樣口上部的緊固螺栓，清洗氣及分流管路中的分子篩，過(guò)濾器，緩沖管，各連接處是否松動(dòng)。 色譜柱部分：首先應確認色譜柱處于良好的工作狀態(tài)，譬如老化是否充分，檢查柱與進(jìn)樣口及檢測器兩端的插入長(cháng)度是否符合要求，柱頭處端面是否整齊，必要時(shí)切掉幾公分。檢查柱兩端的石墨墊密封情況是否良好，必要時(shí)更換之。 檢測器部分：取下收集極，拆下噴嘴檢查是否有堵塞情況，必要時(shí)進(jìn)行疏通。檢查氫氣和空氣的管路是否通暢。觀(guān)察收集極表面是否有生銹或者積炭的情況，進(jìn)行清潔處理。進(jìn)行完上述簡(jiǎn)單處理后開(kāi)機用標樣進(jìn)行試驗，不進(jìn)樣品，空走一遍做一針空白，保留譜圖。單進(jìn)一針用于溶解樣品的溶劑，保留譜圖。 很多實(shí)驗室分析人員在面對度、重現性、重復性這些定義的時(shí)候都會(huì )犯迷糊，到底重復性與重現性的區別與？重復性實(shí)驗和重現性實(shí)驗的先后順序？重現性不好，怎么找原因？。。。等等這些問(wèn)題，今天以后就沒(méi)理由再傻傻分不清楚了吧